DOSAGE DE L`AZOTE TOTAL PAR LA METHODE DE KJELDAHL TP BIOCHIMIE 1ère STL BGB DOSAGE DE L'AZOTE TOTAL: MÉTHODE DE KJELDAHL Principe: Dans un produit biologique (lait, sérum... ) l'azote peut se trouver sous forme minérale et organique (protéines, phospho-amino-lipides... ); pour le doser dans sa totalité, il faut détruire les composés organiques de manière à obtenir tout l' azote sous une même forme minérale. On effectue pour cela une minéralisation. L' azote est ensuite dosé par dosage acide-base. 1. Méthodes de dosage des protéines du lait de vacheMethods for the quantitative determination of milk proteins | Le Lait. MINERALISATION La minéralisation est effectuée à l' aide d' un excès d' acide sulfurique concentré et chaud, en présence d' un mélange de catalyseurs (K2S04 et CuSO4). ATTENTION DANGEREUX: Pas de prélèvement d'acide à la bouche, utiliser une éprouvette. Porter des lunettes pour protéger les yeux d'éventuelles projections. En présence d' acide sulfurique concentré et chaud, le carbone, l' oxygène, l' hydrogène et l' azote des composés organiques se retrouvent sous forme de C02, H20 et NH3.
Mode opératoire [ modifier | modifier le code] Le protocole à suivre pour réaliser un dosage par la méthode du biuret est le suivant: mélanger 3 ml du réactif de Gornall à 2 ml de différentes solutions protéiques de concentrations connues. Incuber ensuite à 37 °C pendant 30 min à l'obscurité. Laisser refroidir puis mesurer les absorbances des solutions à 540 nm. Ceci permet d'obtenir une gamme étalon et de tracer la courbe étalon afin de déterminer la concentration en protéines d'une solution inconnue traitée de la même manière. Avantages [ modifier | modifier le code] Cette méthode peut être utilisée pour un dosage qualitatif, qui peut être quantitatif lorsque l'on dispose de solutions de protéines pures. Elle est qualitative puisque le maximum d'absorption de la coloration varie avec le nombre de liaisons peptidiques présentes dans la molécule. Détermination de la teneur en protéines par détermination de la teneur en azote total : méthode de Kjeldahl. Elle est quantitative parce que l'intensité de l'absorption est proportionnelle à la concentration protidique. Enfin, elle est relativement rapide et peu onéreuse face à la méthode de Kjeldahl qui requiert, au préalable, une minéralisation des protéines.
Elle ne permet pas le dosage direct des nitrates, nitrites, nitrosyles, cyanures qu'il faut en premier lieu diminuer en ammoniac. Lorsque l'azote est sous forme organique, il faut en premier lieu procéder à la minéralisation du composé pour passer à de l'azote minéral. On détruit la molécule organique en l'oxydant à ébullition par H 2 SO 4 concentré, en présence de catalyseur: le carbone s'élimine sous forme de CO 2, l' hydrogène sous forme de H 2 O et l'azote reste en solution sous forme de. Dosage des proteines du lait par la méthode de kjeldahl . Historique C'est en 1883 que Johan Kjeldahl mit au point cette méthode qui porte désormais son nom. La méthode Kjeldahl est une méthode universellement reconnue, adaptable à l'ensemble des types de matrices, sans obligation de calibration ou d'étalonnage. La méthode Kjeldahl est la méthode de référence de détermination des protéines. Principe En milieu basique concentré, le produit minéral, dont on veut doser l'azote, libère de l'ammoniac sous forme gazeuse. Par exemple si le produit à doser est le tétrafluoroborate d'ammonium (), on a: NH 3 est entraîné à la vapeur d'eau.
Placer un entonnoir sur le ballon avec la tige plongeant dans le col. Porter à ébullition et évaporer jusqu'à apparition de fumées blanches. Forcer l'ébullition pendant deux heures. Laisser refroidir à température ambiante. Si la minéralisation est incomplète, l'opération doit être recommencé en diminuant le volume de lait prélevé ou en effectuant une dilution de celui-ci Distillation Transvaser dans un appareil de distillation le Matra, effectuer la distillation. Admettre la vapeur qui assure l'entraînement de l'azote ammoniacal. Procéder au dosage direct. DOSAGE DE L`AZOTE TOTAL PAR LA METHODE DE KJELDAHL. Dosage direct Recouvrir 200 mL d'environ du distillat dans un récipient contenant 10 mL de solution d'acide borique et 3 à 4 gouttes d'indicateur (rouge de méthyl avec du vert de bromocrésol dans éthanol). Réaliser un dosage volumétrique avec une burette graduée contenant de l'acide sulfurique. Relevé les deux volumes équivalents de l'essai (deux volumes) ainsi que le volume à l'équivalence de l'essai à blanc (c'est-à-dire sans poudre de lait) Dosage en retour Procéder comme pour le précédent mais au lieu d'utiliser le rouge de méthyl avec du vert de bromocrésol, n'utiliser que du rouge de méthyl.
= [azote] x coefficient Lors de ce procédé, on minéralise l'azote des protéines, et on dose donc de l'azote minéral. ]
On divise par la masse de l'échantillon pour avoir la concentration en mole d'azote par mg d'échantillon. On divise ensuite par 1000 pour avoir le résultat en mol/L. L'essai de contrôle au saccharose va servir de témoin puisqu'il ne contient pas d'azote. Cependant, expérimentalement, nous allons observer une petite chute de burette. Des réactifs réagissent donc comme l'azote. Ce volume sera alors à retirer aux autres volumes. ] Si l'échantillon contient déjà de l'azote minéral, le résultat comprendra l'azote protéique et l'azote minéral de départ, donc la teneur en protéines totales sera fausse. Pour le sol et l'eau, on parle d'azote minéral en ce qui concerne les nitrates les nitrites et l'ammonium (NH4+). Dosage des protéines du lait par la méthode de kjeldahl 2. Il est apporté sous forme d'engrais chimique mais aussi directement par l'activité des organismes du sol. L'azote minéral représente quelques pourcents de l'azote total, les restes se présentent sous forme organique. ] Rendement = résultat obtenu / résultat attendu x 100 (en Rendement théorique 100% Rendement de la minéralisation: 13, 64) x 100 = 85% Rendement de la distillation Noyale: (20, 71/21, 20) x 100 = 98% Rendement de la distillation Charlotte: (21, 32/21, 20) x 100 = 100% Les rendements de distillation sont bons, cependant le rendement de minéralisation est un peu faible.