Principe de l'analyse L'analyse du cycle cellulaire utilise le colorant nucléaire DAPI pour mesurer la teneur en ADN. Le DAPI se lie spécifiquement à l'ADN double brin. Il n'est donc pas nécessaire d'éliminer l'ARN avant de réaliser les mesures de la teneur en ADN. Cytométrie par analyse d image gratuit. C'est en revanche une étape préalable avec d'autres colorants couramment utilisés pour mesurer les phases du cycle cellulaire, tels que l'iodure de propidium (PI). À l'aide de la microscopie en fluorescence et de l'analyse d'images, la quantification de la teneur en ADN et les mesures des phases du cycle cellulaire sont automatisées. Les préparations d'échantillons peuvent être chargées dans l'un des deux types de lames: NC-Slide A2™ à 2 chambres NC-Slide A8™ à 8 chambres Les échantillons sont analysés à l'aide du cytomètre imageur avancé NucleoCounter ® NC-3000™ où la fluorescence cellulaire est quantifiée par des histogrammes affichant la teneur en ADN. Les marqueurs affichés dans les histogrammes peuvent être utilisés pour identifier les cellules à différents stades du cycle cellulaire.
L'analyse du cycle des cellules fixes permet leur stockage pendant plusieurs semaines. Ainsi, après la fixation de l'éthanol, les cellules peuvent être conservées dans une chambre froide pendant beaucoup plus longtemps avant que l'échantillon ne soit analysé. Cytomètre : définition et explications. Lorsque vous réalisez l'analyse du cycle cellulaire par NucleoCounter ® NC-3000™, vous préparez simplement votre échantillon par lyse ou fixation, ajoutez ensuite des tampons de coloration, chargez l'échantillon et appuyez sur l'analyse. Après l'acquisition et l'analyse des données, processus qui dure une minute, les données relatives au profil du cycle cellulaire ainsi que le pourcentage ou nombre d'événements durant les phases G0/G1, S, G2 ou G1 tardive s'affichent dans la fonction Plot Manager du logiciel NucleoView™. Grâce à son progiciel FlexiCyte™, le NC-3000™ peut même être utilisé pour étudier la prolifération cellulaire avec l'incorporation du BrdU ou de l'EdU. Lorsqu'ils sont détectés par des anticorps marqués par fluorescence ou par Click Chemistry, ils permettent d'étudier la prolifération cellulaire de manière plus approfondie.
Les images de coupes histologiques sont obtenues par des microscopes équipés d'un numériseur. Nos algorithmes d'analyse séparent automatiquement les couleurs des images selon plusieurs méthodes. Voici un exemple sur des images représentant des dommages de type CPD (dimères cyclobutyliques de pyrimidines) induits par des rayons ultraviolets de type B (UVB) dans la peau (laboratoire de Girish Shah). CYTOMÉTRIE EN FLUX, Adjonction de la cytométrie par analyse d'images - Encyclopædia Universalis. 221 images du derme de la peau d'animaux sont analysées en série par un algorithme systématique. Dans l'épiderme, les noyaux cellulaires sont colorés en bleu et ceux endommagés par les UVB sont colorés en brun. Voici une image obtenue par microscopie en fond clair: Les noyaux entourés en rouge sont endommagés et ceux entourés seulement en vert sont intacts ou très peu endommagés. Ces colorations immunohistochimiques sont adaptées au comptage des cellules mais ne le sont pas en général à la mesure de l'intensité des marqueurs. En effet, la réponse des marqueurs est rarement linéaire avec la concentration de leurs cibles.
Le plateau de cytométrie et tri cellulaire de l'Institut Toulousain des Maladies Infectieuses et Inflammatoires est rattaché à la Plateforme technologique des sciences du vivant Toulouse Réseau Imagerie (TRI), labellisée IBiSa. Cytométrie par analyse d'image. Le plateau, qui est certifié iso 9001 version 2015 et NF X50-900 version 2016, propose un ensemble de ressources et de compétences dédiées au tri cellulaire et à l'analyse par cytométrie en flux et en image. Ce plateau, intégré dans une zone de confinement L2, est équipé de 6 analyseurs, 3 trieurs de cellules et 1 cytomètre en image. Le personnel assure du conseil, de l'assistance, des formations ainsi que de l'enseignement à l'Université Toulouse III. Le personnel du plateau peut également vous accompagner dans la mise au point et le développement de projets de recherche sous forme de collaboration.
Les cellules positives aux deux marqueurs figurent en haut à droite. L'intensité de la fluorescence augmente de gauche à droite (axe des X) et de bas en haut (axe des Y). Histogramme Fig. 4. Cytométrie et tri cellulaire - Institut Toulousain des Maladies Infectieuses et Inflammatoires. Ces deux histogrammes représentent les résultats des marqueurs de surface (a) et (b) pris séparément. L'axe des X représente l'intensité de la fluorescence; l'axe des Y représente le nombre de cellules. La barre représente la quantité de cellules positives. Conseil: le site propose plus de 54, 000 antibodies" pour la cytométrie en flux (analyse FACS).
Analyses de la fluorescence (analyse par cytométrie de flux) Des couleurs fluorescentes peuvent être mesurées de manière simultanée à l'aide de la lumière diffusée lors de la cytométrie de flux. Seules quelques cellules produisent une lumière fluorescente de manière endogène. Cytométrie par analyse d image de. En utilisant, par exemple, les substances colorimétriques DAPI et iodure de propidium qui s'intercalent dans l'ADN d'une cellule (entre les paires de base), il est possible de mesurer la quantité d'ADN d'une cellule en déterminant la brillance de cette cellule. Des anticorps marqués par fluorescence peuvent également être utilisés. En général, les anticorps utilisés ciblent les protéines de surface (par ex., les; CD = cluster de différenciation). La densité d'informations peut être augmentée en utilisant des filtres et une lumière laser de couleurs différentes. Si les longueurs d'ondes de la lumière transmise par fluorescence depuis les fluorophores peut être discernée, alors il est possible d'utiliser plusieurs marqueurs de couleurs (coloration multiple).
En bref, le cytomètre en image NC-3000™ est une nouvelle technologie qui permet d'analyser de manière précise et fiable les moindres altérations de l'homéostasie cellulaire au sein de grandes populations. Contrairement à la cytométrie en flux conventionnelle, le NC-3000™ permet à l'utilisateur de valider l'échantillon par inspection visuelle des cellules individuelles. Olaf Nielsen, Anna Fossum et Soren Kjaerulff.